高效液相色谱法测定吡拉西坦葡萄糖注射液的有关物质

发布日期:2018-12-26 11:17 字号:

    吡拉西坦葡萄糖注射液是国家四类新药,为脑代谢改善药,用于脑动脉硬化症及脑血管意外所致的记忆和思维功能减退的治疗。其前期质量研究工作中没有涉及有关物质的检测和控制,为了保证生产和储备过程中产品的质量,笔者对吡拉西坦葡萄糖注射液有关物质进行了全面考察,现将结果报告如下。

    1 材料与方法

    1.1 材料仪器与试药:美国Agilent 1100高效液相色谱仪;Agilem 1100系列紫外多波长检测器、自动进样器柱温箱、四元泵、真空脱气机,Agilent 1 100化学工作站;KQ3200超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司);SYZ-550石英亚沸高纯水蒸馏器(江苏省金坛市金城国胜实验仪器厂);乙腈为色谱纯;水为重蒸馏水;吡拉西坦注射葡萄糖液(批号031021N、031022、031023)由本公司制剂室提供。

    1.2 实验方法与结果

    1.2.1 色谱条件 色谱柱:ODS柱(5μm,4.6mm×150mm);流动相:水;流速:1.3ml/min;紫外检测波长:220nm;柱温:25℃;进样量:2Oμl。

    1.2.2 流动相的选择和zui佳检测波长的选择 (1)流动相的选择:曾选用甲醇-乙腈-水、甲醇-水等分离吡拉西坦,但主峰的保留时间较短,对主要降解产物5-羟甲基糠醛进行检测,发现与主峰分离不完全,影响主药含量测定,故改用水作流动相进行检测,在此条件下,5-羟甲基糠醛保留时间约在2min,而主药的保留时间约在11min 并对专属性进行考察,破坏试验的降解产物保留时间均不影响主药的含量测定。杂质峰可得到较好地分离和检测。(2)检测波长的选择:吡拉西坦在含量测定浓度下,在2OO~400nm 的紫外扫描图显示,其在220.5nm处有zui大吸收,故选择220nm。

    1.2.3 辅料影响试验 精密称取葡萄糖5.0g置100ml量瓶中,加水溶解稀释至刻度,摇匀,制成与吡拉西坦葡萄糖注射葡萄糖浓度相当的溶液;取此溶液1ml置250ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,精密量取2Oμl注入液相色谱仪,记录HPLC检测图谱,结果表明:在选定的液相色谱条件下处方量的葡萄糖对测定无干扰。

    1.2.4 专属性试验 (1)高温破坏;分别称取吡拉西坦原料160mg 2份于5Oml量瓶中,1份在120℃烘烤2.5h,加水溶解,稀释至刻度,摇匀,进行HPLC检测;主要降解产物保留时间约为2.0 min。另1份加水溶解,稀释至刻度,摇匀,在6O℃加热4 h,进行HPLC检测,主要降解产物保留时间约为2.0min,检测结果降解产物与主药分离较好,互不干扰测定。(2)酸破坏:称取吡拉西坦原料160mg于5Oml量瓶中,加0.1mol/LHCL溶液1ml,溶解,在60℃加热2h,加水稀释至刻度,摇匀,进行HPLC检测,主要降解产物的保留时间约为4.2min,检测结果降解产物与主药分离较好,互不干扰测定。(3)碱破坏:称取吡拉西坦原料160mg于5Oml量瓶中.加0.1mol/1Na0H溶液1ml,溶解,在6O℃加热2 h,加水稀释至刻度,摇匀。进行HPLC检测。主要降解产物的保留时间约为2.1min和2.4 min,检测结果降解产物与主药分离较好.互不干扰测定。(4)氧化破坏:称取吡拉西坦原料160mg于5Oml量瓶中,加3O%H2O2溶液0.1ml,溶解,在60℃加热0.5h,加水稀释至刻度,摇匀,进行HPLC检测,主要降解产物的保留时间约为2.0min和2.4min,检测结果降解产物与主药分离较好,互不干扰测定,并说明吡拉西坦极易被氧化。

    1.2.5 测定方法回收率试验 取乙酰胺毗咯烷酮对照品约26、32、38mg,精密称定,分置于1Oml量瓶中,并按处方比加入葡萄糖,用水溶解,稀释至刻度,摇匀。精密量取1ml置100ml量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,作为样品溶液,浓度分别为26μg/ml、32μg/ml、38μg/ml;另精密称取乙酰胺吡咯烷酮对照品适量,用水配制成浓度为32μg/ml的对照溶液。分别精密吸取上述样品溶液和对照溶液2Oμl。注入色谱仪,记录峰面积,计算回收率。结果表明在99.9~100.1之间,并且RSD值均小于0.5 。

    1.2.6 样品的有关物质测定 精密量取本品1ml置25ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,作为供试溶液;精密移取1ml置100ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,作为对照溶液。精密量取对照溶液2Oμl注入液相色谱仪进行预试,调整检测灵敏度,使主成分色谱峰达满标的1O%~2O%;再精密量取供试液2Oμl注入液相色谱仪,记录色谱图至主峰保留时间的2倍,计算各杂质峰面积的和,不得大于对照峰面积(1%)。

    2 讨论

    在方法专属性考察中,主要降解产物的保留时间约为2.0、2.1、2.4和4.2min,降解产物与主药分离较好,互不干扰测定,但目前尚未确定各降解产物的成分,这方面工作将进一步进行研究。在专属性考察中发现,吡拉西坦极易被氧化,所以在检验操作中应予以注意。

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