SRT体积排阻色谱柱

SRT体积排阻色谱柱

供应商:

AUPOS

简 介:

SRT SEC键合固定相采用专利的表面修饰技术,通过在高纯度具有良好机械稳定性的硅胶基质上,键合一层均匀的纳米厚度中性亲水薄膜而制备得到。工艺采用可控的化学修饰技术,因此能确保柱

订购热线:

400-1158-566

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概述

SRT SEC键合固定相采用专利的表面修饰技术,通过在高纯度具有良好机械稳定性的硅胶基质上,键合一层均匀的纳米厚度中性亲水薄膜而制备得到。工艺采用可控的化学修饰技术,因此能确保柱与柱之间有着可靠的重现性。SEC填料采用化学键合技术,表面亲水涂层覆盖完全,因此不仅具有优异的稳定性,而且对蛋白等生物样品的非特异性吸附作用也非常小。精心设计的大孔体积可保证高的分离容量以及优异的分辨率。广泛应用于生物分子及水溶性聚合物的分离和检测。

优异的特性

  • 高柱容量、高分辨率
  • 宽的pH范围 (pH范围2-8.5)
  • 使用寿命长
  • 低盐浓度洗脱,适合LC-MS分析
  • 对于生物样品常见的PEG或者吐温80等物质无强吸附
  • 极低的非特异性吸附, 高的蛋白回收率及活性回收率
  • 解决多维色谱分析应用

应用领域

  • 蛋白药物 (人血白蛋白、免疫球蛋白、HGH、EPO等)
  • 多肽 (Peptide)
  • 水溶性聚合物 (多糖、PEG)
  • 抗生素 (头孢类抗生素)
  • 抗体 (Antibodies)、疫苗 (Vaccine)
  • 病毒蛋白 (Virus Protein)、细胞发酵液、DNA

标准测试谱图及蛋白分子量校正曲线
图1. 标准蛋白测试图谱

色谱柱:  SRT SEC-100、SRT SEC-150、SRT SEC-300、SRT SEC-500和SRT SEC-1000柱( 5 µm, 4.6 mm I.D.×300 mm)
流动相:  150 mM磷酸盐缓冲液,pH 7.0
流速:  0.35 mL/min
检测波长:  UV 214 nm
温度:  室温 (~23°C)
进样体积:  3 µL
样品:  1a)甲状腺球蛋白聚合体; 1) 甲状腺球蛋白 (1.0 mg/mL),
670 kD; 2) BSA双聚体, 132 kD; 3) BSA (1.0 mg/mL), 66 kD;
4) 核糖核酸酶A (1.0 mg/mL), 13.7 kD; 5) 尿嘧啶 (2.5 mg/mL), 120 D。

表1. SRT SEC色谱柱技术参数表

固定相

SRT SEC-100

SRT SEC-150

SRT SEC-300

SRT SEC-500

SRT SEC-1000

SRT SEC-2000

材料

表面键合亲水薄膜的硅胶

表面键合亲水薄膜的硅胶

表面键合亲水薄膜的硅胶

表面键合亲水薄膜的硅胶

表面键合亲水薄膜的硅胶

表面键合亲水薄膜的硅胶

颗粒大小

5 mm

5 mm

5 mm

5 mm

5 mm

5 mm

孔径 (Å)

~ 100

~ 150

~ 300

~ 500

~ 1,000

~ 2,000

蛋白分子量范围

100 - 100,000

500 - 150,000

5,000 - 1,250,000

15,000 - 5,000,000

50,000 - 7,500,000

> 10,000,000

水溶性聚合物
分子量范围 

500 - 10,000

500 - 25,000

1,000 - 100,000

2,500 - 500,000

5,000 - 1,500,000

50,000 - >2,500,000

pH稳定性

2 – 8.5,短时间可耐受 8.5-9.5

2 – 8.5,短时间可耐受 8.5-9.5

2 – 8.5,短时间可耐受 8.5-9.5

2 – 8.5,短时间可耐受 8.5-9.5

2 – 8.5,短时间可耐受 8.5-9.5

2 – 8.5,短时间可耐受 8.5-9.5

反压 (psi for a 7.8x300 mm)

~ 700

~ 700

~ 700

~ 700

~ 700

~ 700

最大压力 (psi)

~ 4,500

~ 4,500

~ 3,500

~ 3,000

~ 3,000

~ 3,000

盐浓度范围

20 mM - 2.0 M

20 mM - 2.0 M

20 mM - 2.0 M

20 mM - 2.0 M

20 mM - 2.0 M

20 mM - 2.0 M

最高使用温度 

~ 80°C

~ 80°C

~ 80°C

~ 80°C

~ 80°C

~ 80°C

流动相兼容性

常规水相及有机相溶剂

常规水相及有机相溶剂

常规水相及有机相溶剂

常规水相及有机相溶剂

常规水相及有机相溶剂

常规水相及有机相溶剂

 

宽的孔径选择

基于独有的表面修饰技术,Aupos  SRT SEC柱提供众多孔径规格 (从100 Å到2000 Å) 以供用户选择。SRT SEC固定相在众多的分离应用中可实现高的分离及最大的回收率。其应用领域涵盖了生物大分子 (如蛋白质和核酸)、生物小分子 (如缩氨酸和寡聚核苷酸)、天然高分子 (如多糖)、人造高分子、生物细胞 (如细菌和病毒),以及纳米粒子等。
图2. SRT SEC柱蛋白分子量校正曲线

色谱柱:  7.8x300 mm, 5 µm
流动相: 150 mM phosphate buffer, pH 7.0
流速: 1.0 mL/min
检测波长: UV 280 nm
进样量: 10 µL
样品:  1). Thyroglobulin, 670 kD; 2). g-Globulin, 158 kD; 3). BSA, 66 kD; 4). Ovalbumin, 44 kD; 5). Myoglobin, 17.6 kD; 6). Ribonuclease A, 13.7 kD; 7). B12, 1.35 kD; 8). Uracil, 120

高容量、高分辨率

体积排阻色谱中,填料的孔体积决定了色谱柱的最高容量。孔体积越大,柱容量就越高,分离效果也越好。Aupos 科技精心设计的SRT固定相具有大的孔体积,例如SRT SEC-150、300、500孔体积为1.3 ~ 1.5 mL/g,而SRT SEC-100、1000、2000的孔体积为1.0 ~ 1.1 mL/g。
图3显示与竞争对手T的SEC柱相比,SRT SEC-150柱具有许多优点。首先,SRT柱比T柱具有更高的分离容量。对于SRT柱和T柱,从全渗透峰 (尿嘧啶) 到全排阻峰 (甲状腺球蛋白) 之间的洗脱体积分别为6.7 mL和6.17 mL。其次,SRT柱比T柱具有更高的分辨率。图中聚-DL-丙氨酸为一种缩氨酸,平均分子量为1 ~ 5 KD (Sigma)。根据经验可知,体积排阻色谱柱中能达到基线分离的两种物质其平均分子量必须相差两倍以上。SRT SEC-150可以很好地分离核糖核酸酶A (13.7 kD) 和聚-DL-丙氨酸,而T柱则不能实现基线分离。另外,SRT柱分离聚-DL-丙氨酸的完美峰形表明其对聚-DL-丙氨酸没有非特异性作用。反之,T柱分离聚-DL-丙氨酸时的峰形变宽和拖尾现象则说明该柱固定相与样品之间存在某些非特异性结合作用。

图3. 相近孔体积的SRT SEC-150与某品牌T SEC柱的比较

色谱柱:  SRT SEC-150, (5 µm, 7.8x300 mm)
流动相:  150 mM PBS, pH 7
流速:  1.0 mL/min
温度:  Ambient (~23° C)
检测波长:  UV 280nm
进样量:  10 µL
样品:  1) Thyroglobulin, 670kD; 2) BSA monomer, 66 kD;
3) Ribonuclease A, 13.7 kD; 4) poly-DL-alanine, 1-5 kDa;  
5) Uracil, 120 D. (All columns are brand new and equilibrated for >5 column volumes with mobile phase to get flat baseline. All samples run on same day).

高载量

上样量是体积排阻色谱分离与纯化的重要指标。从图4可以看到,以BSA作为目标分子,Aupos SRT分析柱的上样量可以超过500 μg,说明其具有高载量的特点。
图4. BSA在SRT SEC-150色谱柱上的载量测试

色谱柱: SRT SEC-150, (5 µm, 7.8x300 mm)
流动相: 150 mM PBS, pH 8.5
流速: 1.0 mL/min
进样体积: 10 µL
检测波长: UV 214 nm

完美的批间重现性

SRT SEC固定相的合成采用可控的表面化学修饰技术,其表面涂层高度重现,使得填料批次与批次之间有着良好的重现性,加之严格的装柱工艺控制,确保了不同批次色谱柱之间的保留时间的差异在5%以内。图5是蛋白标准混合样品在3个不同批次SRT SEC-150柱上分离得到的结果。其中核糖核酸酶A的保留时间差异最大,但也在2%以内。
图5. 三个不同批次SRT SEC-150柱之间的对比图谱 

色谱柱: SRT SEC-150, (5 µm, 4.6x300 mm)
流动相: 150 mM phosphate buffer, pH 7.0
流速: 0.35 mL/min
检测波长: UV 214 nm
温度: Ambient (~23 °C)
进样量: 5 µL
样品:  1) Thyroglobulin (1.0 mg/mL), 2) BSA (1.0 mg/mL), 3) Ribonuclease A (1.0 mg/mL), 4) Uracil (2.5 mg/mL)

优异的稳定性

SRT SEC固定相表面具有一层极致密的亲水、中性聚合物薄膜,可以阻止流动相接触薄膜内侧,防止薄膜脱落,即使在高流速下也能保持高的稳定性。
图6. SRT SEC色谱柱稳定性测试

色谱柱:  SRT SEC-300, (5 µm, 7.8x300 mm)
流速:  1.7 mL/min.
流动相:  250 mM NaCl in 100 mM sodium phosphate, pH 7.0.
样品:  mon°Clonal antibody.

SRT SEC固定相在pH 2.0到8.5之间均具有高的稳定性。图7表明,在用700柱体积的磷酸缓冲液 (pH 8.5)冲洗后,SRT SEC-300的固定相几乎没有改变。
SRT SEC固定相可用于多种缓冲体系,如醋酸铵、磷酸盐、Tris等。当用150 mM的磷酸缓冲液 (pH 7.0)作为流动相时,在45天内进样100次保留时间的偏差在5%以内 (见图7)。SRT SEC固定相可在高盐浓度,如2.0 M下使用。另外,SRT SEC柱在有机溶剂如甲醇、乙醇、THF、DMF、DMSO等中也可使用。
图7. SRT SEC柱pH 8.5条件下稳定性的测试

色谱柱:  SRT SEC-300, (5 µm, 4.6x300 mm)
流动相:  150 mM PBS, pH 8.5
流速:  0.35 mL/min.
检测波长:  214 nm
进样量:  3 µL
样品:  1) Thyroglobulin, 2) BSA, 3) Ribonuclease A, 4) Uracil

高蛋白回收率

  SRT SEC固定相为中性亲水固定相。蛋白和其他生物分子与SRT柱固定相之间几乎没有非特异性相互作用。蛋白不会吸附到硅胶基质表面,因此SRT色谱柱对蛋白具有高的回收率,且能保持很好的活性。例如,在分离酸性蛋白BSA以及碱性蛋白溶菌酶的过程中样品回收率大于95%。

应用实例

图8. SRT SEC-150对抗体的分离
 
色谱柱:  SRT SEC-150, (5 µm, 7.8x300 mm)
流动相:  150 mM PBS, pH 7.0;  流速:  1.0 mL/min
检测波长:  UV 280 nm;   进样量:  10 µL (1.0 mg/mL)

图9. SRT SEC-300对抗体的分离

色谱柱:  SRT SEC-300, (5 µm, 7.8x300 mm)
流动相:  150 mM PBS, pH 7.0
流速:  1.0 mL/min
检测波长:  UV 280 nm
进样量:  10 µL (1.0 mg/mL)

图10. 大肠杆菌发酵液的分离

色谱柱:  SRT SEC, (5 µm, 7.8x300 mm)
流动相:  0.15 M PBS, pH 7.0
流速:  1.0 mL/min
检测波长:  UV 280nm
进样量:  10 µL
样品:  E. coli lysate (2.5 mg/mL)

图11. 人血白蛋白的分析

色谱柱:  SRT SEC-300, (5 mm, 7.8×300 mm)
流动相:  0.2 mol/L PBS (pH7.0,含有1%异丙醇)
流速:  0.6 mL/min
进样量:  20 µL;   检测波长: UV280 nm

图12. 低分子量多聚糖的分离
植物根部提取物中牛膝多糖的分离 (ABPS) (MW<10,000).

色谱柱:  SRT SEC-100, SRT SEC-150, (5 µm, 4.6×300 mm)
流动相:  10 mM PBS, pH 6.8
流速:  0.35 mL/min
检测波长:  UV 192 nm
进样量:  1.0 µL
样品:  牛膝多糖 (ABPS), 50 mg/mL水溶液

图13. BioRad 标准测试蛋白的分离

色谱柱:  SRT-150、300、500, (5 µm,7.8 mm I.D. ×300 mm)
流动相:  0.15 M磷酸盐缓冲液, pH 7.0
流速:  1.0 mL/min
检测波长:  UV 214 nm
进样量:  10 µL
样品:  1). 甲状腺球蛋白 (1.0 mg/mL), 670 kD; 2). IgG (1.0 mg/mL), 158 kD; 3). 卵清蛋白(1.0 mg/mL), 44 kD; 4). 肌红蛋白 (1.0 mg/mL), 17.6 kD; 5). B12 (0.05 mg/mL), 1.35 kD

订购信息

SRT SEC-100


产品名称

粒度

孔径

规格

订货号

SRT SEC-100

5um

100 Å

21.5x600mm

005100-21560

SRT SEC-100

5um

100 Å

21.5x300mm

005100-21530

SRT SEC-100

5um

100 Å

7.5x600mm

005100-7560

SRT SEC-100

5um

100 Å

7.8x300mm

005100-7830

SRT SEC-100

5um

100 Å

7.8x150mm

005100-7815

SRT SEC-100

5um

100 Å

7.8x50 (Guard)

005100-7805

SRT SEC-100

5um

100 Å

4.6x300mm

005100-4630

SRT SEC-100

5um

100 Å

4.6x150mm

005100-4615

SRT SEC-100

5um

100 Å

4.6x50 (Guard)

005100-4605

SRT SEC-150


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SRT SEC-150

5um

150 Å

21.5x600mm

005150-21560

SRT SEC-150

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150 Å

21.5x300mm

005150-21530

SRT SEC-150

5um

150 Å

7.5x600mm

005150-7560

SRT SEC-150

5um

150 Å

7.8x300mm

005150-7830

SRT SEC-150

5um

150 Å

7.8x150mm

005150-7815

SRT SEC-150

5um

150 Å

7.8x50 (Guard)

005150-7805

SRT SEC-150

5um

150 Å

4.6x300mm

005150-4630

SRT SEC-150

5um

150 Å

4.6x150mm

005150-4615

SRT SEC-150

5um

150 Å

4.6x50 (Guard)

005150-4605

SRT SEC-300


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 SRT SEC-300

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21.5x600mm

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21.5x300mm

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5um

300 Å

7.5x600mm

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 SRT SEC-300

5um

300 Å

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005300-7830

 SRT SEC-300

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 SRT SEC-300

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005300-7805

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5um

300 Å

4.6x300mm

005300-4630

 SRT SEC-300

5um

300 Å

4.6x150mm

005300-4615

 SRT SEC-300

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4.6x50 (Guard)

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SRT SEC-500


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21.5x300mm

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5um

500 Å

7.5x600mm

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SRT SEC-500

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500 Å

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SRT SEC-500

5um

500 Å

7.8x150mm

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SRT SEC-500

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500 Å

7.8x50 (Guard)

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SRT SEC-500

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500 Å

4.6x300mm

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SRT SEC-500

5um

500 Å

4.6x150mm

005500-4615

SRT SEC-500

5um

500 Å

4.6x50 (Guard)

005500-4605

SRT SEC-1000


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粒度

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 SRT SEC-1000

5um

1000 Å

21.5x600mm

005950-21560

 SRT SEC-1000

5um

1000 Å

21.5x300mm

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 SRT SEC-1000

5um

1000 Å

7.5x600mm

005950-7560

 SRT SEC-1000

5um

1000 Å

7.8x300mm

005950-7830

 SRT SEC-1000

5um

1000 Å

7.8x150mm

005950-7815

 SRT SEC-1000

5um

1000 Å

7.8x50 (Guard)

005950-7805

 SRT SEC-1000

5um

1000 Å

4.6x300mm

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 SRT SEC-1000

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1000 Å

4.6x150mm

005950-4615

 SRT SEC-1000

5um

1000 Å

4.6x50 (Guard)

005950-4605

SRT SEC-2000


产品名称

粒度

孔径

规格

订货号

 SRT SEC-2000

5um

2000 Å

21.5x600mm

005980-21560

 SRT SEC-2000

5um

2000 Å

21.5x300mm

005980-21530

 SRT SEC-2000

5um

2000 Å

7.5x600mm

005980-7560

 SRT SEC-2000

5um

2000 Å

7.8x300mm

005980-7830

 SRT SEC-2000

5um

2000 Å

7.8x150mm

005980-7815

 SRT SEC-2000

5um

2000 Å

7.8x50 (Guard)

005980-7805

 SRT SEC-2000

5um

2000 Å

4.6x300mm

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 SRT SEC-2000

5um

2000 Å

4.6x150mm

005980-4615

 SRT SEC-2000

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2000 Å

4.6x50 (Guard)

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注:以上为常备规格订货信息,其它规格或特殊定制产品,电询。服务热线:400-1158-566

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