高效液相色谱仪的正确操作步骤!

发布日期:2019-05-22 14:15 字号:

高效液相色谱仪(HPLC)是应用高效液相色谱原理,主要用于分析高沸点不易挥发的、受热不稳定的和分子量大的有机化合物的仪器设备。它由储液器、输液泵、进样器色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。

储液器中的流动相被高压泵打入检测系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)内,由于样本溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中作相对运动时,经过反复多次的“吸附-解吸”的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样本浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式输出检测结果。

色谱特点高效液相色谱仪操作步骤如下:

1). 过滤流动相,根据需要选择不同的滤膜.

2). 对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。

3). 打开hplc工作站(包括计算机软件和色谱仪),连接好流动相管道,连接检测系统。

4). 进入hplc控制界面主菜单,点击manual,进入手动菜单。

5). 有一段时间没用,或者换了新的流动相,需要先冲洗泵和进样阀。

6). 调节流量,初次使用新的流动相,可以先试一下压力,流速越大,压力越大,一般不要超过2000。

7). 设计走样方法。

8). 进样和进样后操作。

9). 关机时,先关计算机,再关液相色谱。

10). 填写登记本,由负责人签字。

11). 流动相均需色谱纯度,水用20m的去离子水。

12). 柱子是非常脆弱的,第一次做的方法,先不要让液体过柱子。

13). 所有过柱子的液体均需严格的过滤。

14). 压力不能太大,不要超过2000 psi。

高压——压力可达150~300 kg/cm2。色谱柱每米降压为75 kg/cm2以上。

高速——流速为0.1~10.0 mL/min。

高效——塔板数可达5000/米。在一根柱中同时分离成份可达100种。

高灵敏度——紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品少。

HPLC与经典液相色谱相比有以下优点:

速度快——通常分析一个样品在15~30 min,有些样品甚至在5 min内即可完成。

分辨率高——可选择固定相和流动相以达到分离效果。

灵敏度高——紫外检测器可达0.01ng,荧光和电化学检测器可达0.1pg。

色谱柱可反复使用——用一根色谱柱可分离不同的化合物。

样品量少,容易回收——样品经过色谱柱后不被破坏,可以收集单一组分或做制备。

国家标准:《高效液相色谱仪》(GB/T 26792-2011)

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