液相色谱仪工作原理 液相色谱仪需要检定的主要参数

发布日期:2018-12-19 09:10 字号:

1 液相色谱仪及其工作原理和组成部分
借助混合物在固-液、不互溶的两种液体间分配比的不同分离混合物, 并且完成鉴定分析一类工作的仪器即为液相色谱仪。泵、储液装置、进样装置、色谱柱、记录仪、检测装置等为系统的主要组成, 在高压泵的作用下储液器内流动相进入系统, 样品溶液从进样器到达流动相, 并且随之到达色谱柱;样品溶液内, 不同组成物质分配系数各不相同, 在两相内进行相对运动, 并且在多次吸附和分配过程中, 移动速度的差距越来越明显, 分离之后以单个组分的形式按照一定的顺序从柱中排出。到达检测装置后, 浓度变为电信号并且输送至记录装置, 通过图谱的方式对数据进行表达。输液、进样、分离、检测及数据处理系统为液相色谱仪的重要组成。
(1) 样品进样系统。通常通过高压进样间、隔膜注射进样器等进行处理, 若想使样品分析的重复性有所改善, 需要将进样量设置为常量。
(2) 样品输液系统。此部分系统主要由流动相存储装置、梯度装置、高压泵等组成, 同样情况下高压泵压强在十四点七至四十四兆帕的范围内, 在高压作用下, 样品液体能够保持极快的速度穿越层析柱, 并且保持高速率的过程中能够对样品层析柱内的四周扩散问题进行控制。就密度梯度装置、存储装置方面而言, 能够在样品、固定相等方面变化的作用下改变样品流动相, 例如对洗脱液吸水性、酸碱度、离子浓度等进行调整和改变, 为不同样品成分的分离提供更多支持, 对分离效果进行改善等。
(3) 样品分离系统。恒温装置、连接装置、色谱柱等均涵盖在分离系统中, 通常情况下色谱柱长度维持在十厘米至五十厘米的范围中, 并且在2根连用的情况下通过增设连接管的方式对其进行处理, 其内径大小需要控制在二至五毫米的范围内, 并且通过钛合金、厚壁玻璃管、不锈钢一类的材料对其进行制作, 其中具有半径2.5~5μm粒度固定相, 并且固定相基质部分为硅胶、树脂等材料构成, 并且在硅酸基因排除的情况下其惰性较强, 并且具有表面积较大、多孔性的属性, 在表面机械涂渍的作用下或是经过化学法偶联苯基、氨基、磷酸基等不同基因进行处理, 便会产生较好的选择性。以多孔性硅胶表面偶联豌豆凝集素为例进行分析, 其能够将分离纤维细胞内的糖蛋白。此外, 固定相基质半径较小, 能够简单的呈现致密和均匀的状态, 并且能够对涡流扩散方面的问题进行控制。因基质半径较小、微孔浅的特点, 在该区域内的传质不长, 上述内容能够促进分辨率的提升, 并且能够缩小谱带宽度, 结合柱效理论, 发现半径越小的情况下塔板理论数的N值便更大, 进而对半径和分辨率之间成反比的观点进行进一步论证。恒温装置对仪器温度调控具有重要帮助, 能够将温度从二十五摄氏度转变为六十摄氏度, 在温度逐渐上升的情况下, 层析柱内样品的流动速度同样逐渐增加, 为分析时间的节省、分析分离效率的提升提供更多支持。下图为液相色谱仪分离方式及主要组成图。

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