色谱法的不同分类标准

发布日期:2018-07-14 08:02 字号:

(1) 按两相状态分类:以流动相状态为标准划分类型。用气体作为流动相的色谱法称为气相色谱法Gaschromatography (GC);用液体作为流动相的色谱法称为液相色谱法 Liquid chromatography LC.
(2) 按样品组分在两相间的分离机理分类:利用组分在流动相和固定相之间的分离原理不同而命名的分类方法。包括,吸附色谱法、分配色谱法、离子交换色谱法、凝胶色谱法、凝胶渗透色谱法、离子色谱法和超临界流体色谱法等十余种方法。
(3) 按色谱技术分类:为提高组分的分离效能和高选择性,采取了许多技术措施,根据这些色谱技术的性质不同而形成的色谱分类法。例如,程序升温气相色谱法、反应气相色谱法、裂解气相色谱法、顶空气相色谱法、毛细管气相色谱法、多维气相色谱法、制备色谱法等七种方法。
(4) 按固定相存在形态分类:根据固定相在色谱分离系统中存在的形状,可分为柱色谱法(其中又含填充柱色谱法和开管柱色谱法)、平面色谱法(其中又含纸色谱法和薄层色谱法)等九种方法。
(5) 按色谱动力学分类:根据流动相洗脱的动力学过程不同而进行分类的色谱法,例如,冲洗色谱法、顶替色谱法和迎头色谱法等。

液相色谱法的分类详解

1、按溶质在两相分离过程的物理化学原理分类:

(1)吸附色谱(Adsorption Chromatography)用固体吸附剂作固定相,以不同溶剂作流动相,依据样品中各组分在吸附剂上吸附性能的差别来实现分离。
(2)分配色谱(Partition Chromatography)用载体在固相基体上的固定液作固定相,以不同极性溶剂作流动相,依据样品中各组分在固定液上分配性能的差别来实现分离。根据固定相和液体流动相对极性的差别,又可分为正相分配色谱和反相分配色谱。当固定相的极性大于流动相的极性时,可称为正相分配色谱或简称正相色谱(Normal Phase Chromatography);若固定相的极性小于流动相的极性时,可称为反相分配色谱或简称反相色谱(Reversed Phase Chromatography)。
(3)离子色谱(Ion Chromatography) 用高效微粒离子交换剂作固定相,以具有一定PH值的缓冲溶液作流动相,依据离子型化合物中各离子组分与离子交换剂上表面带电荷基团进行可逆性离子交换能力的差别而实现分离。
(4)体积排阻色谱(Size Exclusion Chromatography) 用化学惰性的多孔性凝胶作固定相,按固定相对样品中各组分分子体积阻滞作用的差别来实现分离。
(5) 亲和色谱(Affinity Chromatography) 以在不同基体上,键合多种不同特征的配体作固定相,用不同PH值的缓冲溶液作流动相,依据生物分子(氨基酸、肽、蛋白质、核酸、核苷酸、核酸、酶等)与基体上键连的配位体之间存在的特异性亲和作用能力的差别,而实现对具有生物活性的生物分子的分离。

2 按溶质在色谱柱洗脱的动力学过程分类:

(1)洗脱法(elution method) 又称淋洗法,如将含三组分的样品注入色谱柱,流动相连续流过色谱柱,并携带样品组分在柱内向前移动,经色谱分离后,样品中不同组分依据与固定相和流动相相互作用的差别,而顺序流出色谱柱。
(2)前沿法(frontal method)又称迎头法,如将含三个等量组分的样品溶于流动相,组成混合物溶液,并连续注入色谱柱,由于溶质的不同组分与固定相的作用力不同,则与固定相作用最弱的第一个组分首先流出,其次是第二个组分与第一个组分混合流出,最后是与固定相作用最强的第三个组分与第二个和第一个组分混合流出。此法仅第一个组分纯度较高,其他流出物皆为混合物,不能实现各个组分的完全分离,现已较少采用。
(3) 置换法(displacement method) 又称顶替法,当含三种组分的混合物样品注入色谱柱后,各组分皆与固定相有强作用力,若使用一般流动相无法将他们洗脱下来,为此可使用一种比样品组分与固定相间作用力更强的置换剂(或称顶替剂)作流动相,当它注入色谱柱后,可迫使滞留在柱上的各个组分,依其与固定相作用力的差别而依次洗脱下来,且各谱带皆为各个组分的纯品。置换法现已在大规模制备色谱中获广泛应用,在生物大分子纯品制备中取得良好的效果.

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